Die teilnehmenden Mannschaften trennen fünf Pokalsiege von einer Reise nach Berlin, doch zwei Mannschaften können bereits in der 1. Hauptrunde die Strecke in die Hauptstadt erkunden. Mit dem 1. FC Union Berlin und Tennis-Borussia Berlin konnten sich gleich zwei Mannschaften von der Spree qualifizieren. Mit den „Eisernen“ aus der Wuhlheide und dem umgebauten Stadion an der alten Försterei werden die Roten Teufel aber spätestens im Verlauf der Saison 2009/10 noch Bekanntschaft machen, da der 1. FC Union den Aufstieg in die 2. Bundesliga feiern konnte. Kurz vor dem ersehnten Ziel Berlin stoppen muss dagegen der Gegner des SV Babelsberg 03, welcher in Potsdam beheimatet ist.

Als Sieger des Mecklenburg-Vorpommern-Pokals konnte sich der Oberligist Torgelower SV Greif für den diesjährigen Pokalwettbewerb qualifizieren. Kaiserslautern und Torgelow trennen nicht nur 2 Ligen, sondern auch stolze 833 Kilometer, womit eine Reise nach Torgelow die weiteste Anreise zu einem DFB-Pokalspiel bedeuten würde. Eine Entschädigung für die weite Fahrt könnte sicherlich ein kühlendes Bad in der nahen Ostsee sein.

Auch in heimischen Gefilden warten auf den FCK interessante Gegner, schließlich haben sich mit den Offenbacher Kickers, dem SV Wehen-Wiesbaden, Wormatia Worms, Eintracht Trier und dem SV Elversberg bekannte Vereine aus der näheren Umgebung für die 1. Hauptrunde qualifizieren können.
Eine Revanche für das Ausscheiden im vergangenen Jahr beim FC Carl-Zeiss Jena wird im Übrigen nicht möglich sein, die Thüringer scheiterten im Landespokalfinale am FC Rot-Weiß Erfurt. Ein Pflichtspiel zwischen Erfurt und den Roten Teufeln gab es zuletzt in der 2. Pokalrunde der Spielzeit 2005/06.
Aufgrund der Einführung der 3. Liga und der veränderten Ab- und Aufstiege gibt es auch für den DFB-Pokal eine kleine Reform bei der Qualifikation. Die vier besten Mannschaften der abgelaufen Saison in Liga 3 und die vier am schlechtesten platzierten Teams aus der 2. Bundesliga werden als Amateure gewertet. Somit können die Roten Teufel in Runde 1 auch auf die Mannschaften aus Frankfurt und Düsseldorf treffen, welcher mit einer Kapazität von über 50.000 Zuschauern die größten Stadien aufweisen können.

In der samstägigen Auslosung der Pokalpartien werden nach alt bekanntem Muster zwei Lostöpfe gebildet und einem Amateurverein eine Mannschaft aus dem Profi-Topf zugelost. Ein Aufeinandertreffen von Bundesligisten untereinander ist mit Ausnahme der Aufsteiger in die 2. Bundesliga und dem FSV Frankfurt nicht möglich.

Die 1. Hauptrunde wird vom 31.07 bis 03.08.2009 gespielt, alle Spiele überträgt der Pokalpartner Premiere live und in der Konferenz.

Auf folgende Mannschaften kann der FCK in Runde 1 treffen:     
     
Mögliche Gegner des FCK – Liga – Entfernung von KL – Stadion / Plätze

FSV Frankfurt – 2. Bundesliga –  116 km – Bornheimer Hang / 10.300

VfL Osnabrück – 3. Liga – 440 km – Osnatel-Arena / 16.130

FC Ingolstadt 04 – 3. Liga – 373 km – Tuja-Stadion / 11.408

SV Wehen Wiesbaden – 3. Liga – 90 km – Brita-Arena / 12.066

1. FC Union Berlin – 2. Bundesliga – 654 km – An der alten Försterei / 18.922

Fortuna Düsseldorf – 2. Bundesliga – 277 km – Esprit-Arena / 51.500

SC Paderborn – 2. Bundesliga – 383 km – Paragon-Arena / 15.000

SpVgg. Unterhaching – 3. Liga – 442 km – Generali Sportpark / 15.053

SpVgg Neckarelz –  Verbandsliga – 136 km – Elzstadion / 4.500

SV Wacker Burghausen – 3. Liga – 520 km – Wacker-Arena / 10.000

SpVgg Weiden – Regionalliga – 396 km – Stadion am Wasserwerk / 15.000

TeBe Berlin – Regionalliga – 654 km – Mommsenstadion / 11.500

SV Babelsberg 03 – Regionalliga – 625 km – Karl-Liebknecht Stadion / 10.499

FC Oberneuland Bremen – Regionalliga – 568 km – Sportpark Vinnenweg / 5.000

SC Concordia Hamburg – Oberliga – 602 km – Stadion Marienthal / 5.500

Offenbacher FC Kickers – 3. Liga – 117 km – Stadion am Bieberer Berg / 26.500

Torgelower SV Greif – Oberliga – 833 km – Spartakus-Stadion / 10.000

FC Germania Dattenfeld – Oberliga – 226 km – Sportplatz Dattenfeld / 2.000

VfB Speldorf  – Verbandsliga – 306 km – Stadion Blötter Weg / 2.500

Braunschweiger TSV Eintracht – 3. Liga – 445 km – Eintracht-Stadion / 23.500

BSV Kickers Emden – Oberliga – 561 km – Embdena Stadion / 7.200

SV Eintracht Trier – Regionalliga – 116 km – Moselstadion / 10.252

SV Elversberg – Regionalliga – 47 km – Waldstadion Kaiserlinde / 6.008

SG Dynamo Dresden – 3. Liga – 567 km – Rudolf-Harbig-Stadion / 9.000

FC Magdeburg – Regionalliga – 533 km – Stadion Magdeburg / 27.250

VfB Lübeck – Regionalliga – 660 km – Lohmühle / 17.869

FC 08 Villingen – Oberliga – 294 km – Stadion im Friedengrund / 12.000

VfR Wormatia 08 Worms – Regionalliga – 58 km – Wormatia-Stadion / 6.997

FC Rot Weiß Erfurt – 3. Liga – 363 km – Steigerwaldstadion / 19.439

SC Preußen Münster – Regionalliga – 390 km – Preußenstadion / 15.050

VfL Sportfreunde Lotte – Regionalliga – 436 km – PGW-Arena / 5.500

SG Sonnenhof Großaspach – Regionalliga – 176 km – Frankenstadion Heilbronn / 17.284