Gezogen werden die Lose – wie bei der Auslosung zur 1. Pokalrunde – aus zwei unterschiedlichen Töpfen. Während sich im ersten Lostopf die drei verbliebenen Amateurvereine befinden, wird der zweite Lostopf mit den 29 qualifizierten Mannschaften aus der 1. und 2. Bundesliga aufgefüllt.

Zuerst werden für die verbliebenen Amateure aus Osnabrück, Lübeck und Trier die passenden Gegner aus dem Profi-Topf ermittelt, wobei der Amateurverein in jedem Fall auch in der kommenden Runde Heimrecht genießen wird. Anschließend werden die 13 verbleibenden Duelle aus dem Topf der Profivereine gezogen, wobei immer der zuerst gezogene Verein Heimrecht genießt.
Für den FCK und seinen reisefreudigen Anhang sind die im Pokal verbleibenden Mannschaften keine Unbekannten. Lediglich gegen den VfB Lübeck liegt das letzte Aufeinandertreffen schon über 12 Jahre zurück. Damals gewannen die Roten Teufel auf dem heimischen Betzenberg mit 7:0 gegen die Hansestädter und stiegen nach einem Jahr Abstinenz wieder in die 1. Bundesliga auf. Lübeck und Kaiserslautern trennen rund 660 Kilometer, die gleiche Entfernung gilt es von der Barbarossa-Stadt auch nach Berlin zu überwinden. Ein Gastspiel in der Hansestadt oder der Hauptstadt wäre somit das weiteste Auswärtsspiel in dieser Runde.

Vielleicht hat Inka Grings aber auch ein glückliches Händchen und beschert dem Betzenberg nach beinahe vier Jahren wieder ein Heimspiel im DFB-Pokal. Wenngleich die letzten Auftritte vor heimischem Publikum wenig erfolgreich waren, so waren es doch packende Spiele an die man sich auch nach einigen Jahren noch erinnert. Eine Revanche für das unglückliche Pokalaus im Elfmeterschießen gegen Mainz 05 beim letzten Pokal-Heimspiel am 20. Dezember 2005 ist in diesem Jahr nicht möglich: Mainz schied als einer von nur drei Profi-Vereinen bei einem Amateurverein aus.

Die Auslosung zur zweiten DFB-Pokal-Runde wird im Anschluss an die Bundesliga-Partie TSG Hoffenheim gegen Bayern München am 8. August 2009, 18:30 Uhr, bei Sky übertragen.

Folgende Mannschaften haben sich für die 2. DFB-Pokal-Runde qualifiziert:

1. FC Kaiserslautern (2. Bundesliga)
VfB Lübeck (Regionalliga Nord)
SV Eintracht Trier (Regionalliga West)
VfL Osnabrück (3. Liga)
FC St. Pauli (2. Bundesliga)
TSV Alemannia Aachen (2. Bundesliga)
Karlsruher SC (2. Bundesliga)
Arminia Bielefeld (2. Bundesliga)
Energie Cottbus (2. Bundesliga)
FC Augsburg (2. Bundesliga)
MSV Duisburg (2. Bundesliga)
SpVgg Greuther Fürth (2. Bundesliga)
TSV 1860 München (2. Bundesliga)
TuS Koblenz (2. Bundesliga)
Rot Weiss Ahlen (2. Bundesliga)
Rot-Weiß Oberhausen (2. Bundesliga)
VfL Wolfsburg (1. Bundesliga)
FC Bayern München (1. Bundesliga)
VfB Stuttgart (1. Bundesliga)
Hertha BSC (1. Bundesliga)
Hamburger SV (1. Bundesliga)
Borussia Dortmund (1. Bundesliga)
TSG Hoffenheim (1. Bundesliga)
FC Schalke 04 (1. Bundesliga)
Bayer 04 Leverkusen (1. Bundesliga)
SV Werder Bremen (1. Bundesliga)
1.FC Köln (1. Bundesliga)
Eintracht Frankfurt (1. Bundesliga)
VfL Bochum (1. Bundesliga)
Borussia Mönchengladbach (1. Bundesliga)
SC Freiburg (1. Bundesliga)
1. FC Nürnberg (1. Bundesliga)